酶聯免疫吸附試驗（enzyme linked immunosorbent assay，簡寫ELISA）指將抗原或抗體結合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體特異性結合進行免疫反應的檢測方法。其基本原理如圖1所示。目前，非洲豬瘟ELISA抗體檢測試劑盒的原理主要有三種，分別是間接法、阻斷法（競爭法）和雙抗原夾心法。

1. 間接法

間接法通常用于測定血清中的IgG抗體，由于只要獲得抗原，配合通用的酶標抗豬IgG的二抗就可以快速建立ELISA方法。產品性能取決于抗原的純度，抗原純度不夠會導致非特異IgG的結合，產生假陽性。其主要原理如圖2所示。

2. 阻斷法

阻斷法又叫競爭法，通常用于測定血清中的IgG抗體。阻斷ELISA需要抗原和特異性的單抗或多抗。對抗原的純度要求不高，產品的性能取決于單抗或多抗的特異性和親和力。背景干擾低，特異性高。阻斷ELISA方法的原理如圖3所示。

3. 雙抗原夾心法

雙抗原夾心ELISA用于測定血清中IgG、IgM、IgA等總抗體。技術難度最高，需要制備高質量的酶標抗原。該方法不受非特異性IgG的干擾，背景干擾小，敏感性和特異性高。其原理如圖4所示。

非洲豬瘟ELISA抗體檢測試劑盒的使用及其操作步驟詳見試劑盒說明書。另外，在使用試劑盒時，應注意以下事項：

1. 檢測樣本的注意事項

如果樣本處理或保存不當，會出現溶血等情況，紅細胞破裂，血紅蛋白溢出，紅細胞中的各種蛋白和酶使血清成分變的復雜，尤其亞鐵血紅素具有HRP酶的作用，從而會影響檢測結果。

樣品溶血主要由以下原因造成：①采血后，不離心，連同針管一同郵寄；②采血后，低溫冷凍，然后解凍；③采血后，未及時靜置，有劇烈震蕩的情況。

避免溶血應注意以下幾點：①采血后，靜置2h以上 （室溫），或采血后，靜置30min后再離心（離心過早，膠凍樣血清），靜置或離心出血清后，及時分裝到EP管中妥善保存。②冷鏈運輸樣本；③樣本的保存：室溫不超過8h，4℃不超過5天，-20℃可長期保存；④檢測時，應充分回溫并混勻，避免反復凍融；⑤嚴格按照試劑盒的稀釋比例，稀釋血清樣品。

2. 檢測環境的控制

檢測期間，注意實驗室的溫度、光照和通風情況，應保證在室溫（18℃~25℃）條件下操作，不在太陽直射或空調出風口下試驗。操作桌面應保持整潔，無揮發性液體。

3. 規范樣本稀釋、加樣、轉移等操作規程

加樣用樣本的稀釋，應先加稀釋液，再加待檢血清。

加樣期間，所加物應加注到ELISA板孔底部，不要黏附在孔壁上。板孔內液體輕輕搖晃，不要將液體濺出孔外，更不要產生氣泡，避免有弱陽性樣品顯假陰性。

正確使用移液槍，確保移液槍的量程準確，移液槍頭與移液槍是否匹配，移液的過程中盡量避免氣泡的產生。建議采用“吸二打一”的方式，“吸二打一”的方法：也就是吸液時移液器按到底，打液時，按到移液器第一個停止位置，慢吸液體，快速打下液體，槍頭需垂直于板孔，不可插入板孔，避免溶液掛壁和交叉污染。

4. 洗板應注意的問題

按說明書操作，確保每孔所加洗滌液量的準確和均一，間隔30s，人工清洗需5次，機洗3次即可，調好針頭與孔底的距離，過多會溢出板孔，污染其它樣本，過少則達不到洗滌的效果。

快速甩盡板孔內的液體。防止板孔里的液體對流，產生交叉污染，最后一次洗板后，用吸水紙墊厚毛巾拍干。拍干后觀察板孔，未被清除的氣泡用未使用過的槍頭戳破或洗耳球輕輕吹破。

5. 試劑盒使用的注意事項

試劑盒應在2-8℃保存，不要貼冰箱壁，避免結凍。板條若未能一次用完，剩余板條用塑料袋封口后密封2-8℃保存。

試劑盒使用前應提前拿出至室溫，待回溫后方可使用，回溫時不要使用水浴或溫箱回溫。

使用前充分混勻，吸出的多余液體禁止倒回。

為確保檢測的結果準確，不同批次的試劑盒的試劑成分都要經過優化處理，同時要避免不同批次間的試劑盒成分的混合使用。